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    SiHa人子宮頸鱗癌細胞

    SiHa人子宮頸鱗癌細胞

    簡(jiǎn)(jiǎn)要描述:SiHa人子宮頸鱗癌細胞介紹:
    種屬:人;貼壁生長(cháng)(cháng);生長(cháng)(cháng)周期:3~4天
    傳代方法:
    第一次建議1:2傳代
    凍存條件:
    無(wú)(wú)血清凍存液(貨號:C7001)
    細胞描述:
    本庫的細胞僅用于科研工作,未經(jīng)(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者
    培養備注:
    用無(wú)(wú)菌離心管收集瓶子培養基,留作過(guò)(guò)渡培養

    產(chǎn)(chǎn)品型號: YKLSiHa

    所屬分類(lèi)(lèi):

    更新時(shí)(shí)間:2024-04-30

    詳細說(shuō)(shuō)明:

    SiHa人子宮頸鱗癌細胞介紹:

    種屬:人;貼壁生長(cháng)(cháng);生長(cháng)(cháng)周期:3~4天

    SiHa人子宮頸鱗狀細胞癌細胞到后處理:

    細胞在培養瓶中培養至良好狀態(tài)(tài)后灌滿(mǎn)(mǎn)培養液并封好瓶口是細胞運輸的好辦法。收到細胞回到自己的實(shí)(shí)驗室后,先打開(kāi)(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)(gè)瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無(wú)(wú)菌操作,培養箱靜置2-4小時(shí)(shí)。鏡下觀(guān)(guān)察:未超過(guò)(guò)80%匯合度時(shí)(shí),可將瓶裝的培養液收集至離心管中,加入6ml培養基,放入37℃、5%CO2孵箱培養;超過(guò)(guò)80%匯合度時(shí)(shí),根據情況傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)(jiàn)細胞培養步驟。(注意發(fā)(fā)貨的是密封培養瓶的話(huà)(huà),放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的培養基,另外一瓶用自己配的培養基)。

    SiHa人子宮頸鱗癌細胞培養步驟:

    一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)(guò)夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過(guò)(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。

    二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)(jìn)行傳代培養。

    a)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

    1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

    2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀(guān)(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

    3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

    4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6ml培養液的新皿中或者瓶中。

    b)、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

    方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

    方法二:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

    PS:若客戶(hù)(hù)收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無(wú)(wú)菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右培養基混勻,放入培養箱過(guò)(guò)夜培養后查看細胞密度:若密度未超過(guò)(guò)80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)(guò)80%,可直接進(jìn)(jìn)行傳代(方法同上)。

    三、細胞凍存:(注:無(wú)(wú)血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司貨號:C7001)

    1、細胞生長(cháng)(cháng)至覆蓋培養瓶的80%面積時(shí)(shí),棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;

    2、添加0.25%YDBM消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀(guān)(guān)察,待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

    3、用適量的凍存液重懸細胞,并放置于凍存管中;

    4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃。

     

     

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